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木犀草素是從金銀花、野菊花等植物中提取出來的一種天然的黃酮類化合物,它具有多種藥理活性,比如抗炎,抗過敏,抗菌,抗病毒等。木犀草素在自然界中多以糖苷的形式存在,具有C6-C3-C6 碳骨架的苯并-γ-吡喃酮結構。化學式為C15H10O6,分子量是286.24,微溶于水,具弱酸性,可溶于堿性溶液中。木犀草素能夠與鐵、鎂、鈣、銅、鋁、鋯等金屬離子生成帶色的絡合物。主要存在于金銀花、菊花、荊芥、白毛夏枯草、洋薊、紫蘇屬、黃芩屬、裸花紫珠等天然藥材中。
藥用植物中木犀草素含量的測定方法,一般采用高效液相色譜(HPLC)或液相色譜質譜聯(lián)用(LC-MS)。
1.樣品提取
將樣品進行粉碎,過二號篩,精確稱量2g,放置于錐形瓶中,加入85%的甲醇溶液25ml。加熱回流1.5h放冷稱量,用85%甲醇補充減少的重量,搖勻過濾待測。
2.色譜條件
使用C18色譜柱,250mmx4.6mm,5um;柱溫:室溫。流動相為甲醇-0.5%冰醋酸溶液(50:50),或甲醇為流動相A,0.05%磷酸溶液為流動相B,梯度洗脫,流速1.0ml/min;紫外檢測器,波長350nm,進樣量5-10uL;理論塔板數(shù)不低于5000。
3.標準曲線
稱取木犀草素的標準品若干克,加入甲醇制成70ug/ml的溶液。然后,進行成倍的梯度稀釋5-7個點,一般是用6個。稀釋的最低濃度點要在檢測限的范圍內,確保線性的準確性。將標準溶液依次進樣到HPLC中,測出對應的色譜峰。由于這個標準溶液是相對純凈的,可以獲得有效的色譜峰保留時間。通過這個保留時間的位置,就可以去尋找樣品的目標色譜峰。對色譜峰面積進行積分,并結合對應的溶液濃度,繪制出標準曲線,得到回歸方程,相關系數(shù)r2>0.999。
4.樣品測定和計算
根據(jù)測出來樣品的色譜峰,對它進行手動或自動積分,代入到回歸方程,是可以計算出樣品的木犀草素含量。