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齊墩果酸是五環(huán)三萜類化合物,主要來源于女貞子、青葉膽、夏枯草、連翹、山茱萸等傳統(tǒng)中藥材,具有廣泛的藥理活性,比如降血糖,保護肝臟等。化學式為C30H48O3,分子量為456.7,不溶于水,但溶于甲醇,乙醇,乙醚,丙酮和氯仿等。它屬于齊墩果烷型,結(jié)構(gòu)中包含了5個環(huán)狀骨架和3個異戊二烯側(cè)鏈。
檢測樣本中的齊墩果酸含量的方法主要包括高效液相色譜(HPLC)和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)法,另外也有薄層色譜法。這里以HPLC為例簡單的介紹一下測定含量的過程,僅供參考。
1.樣品處理
將植物樣進行粉碎處理并過40目篩,精密稱量1.0g的粉末樣本加入25ml的甲醇溶解。超聲波(300-400W,40Hz)提取30min冷卻后用甲醇補足失去的重量,過濾后待測。
2.色譜條件
C18的反相色譜柱,250mmx4.6mm,5um,柱溫30℃左右;流動相以甲醇和0.2%磷酸水(85:15),流速為1ml/min;紫外檢測器,波長210nm;進樣量10-20uL。
3.標準曲線
精密稱取齊墩果酸的標準品用甲醇溶解并定容,梯度稀釋5-7個濃度點在檢測器的有效范圍內(nèi)。以上述的色譜方法為條件進樣到HPLC中測出來各個標準溶液的色譜峰圖,并記錄色譜峰的保留時間和峰面積。對色譜峰面積進行積分并結(jié)合它對應(yīng)的標準溶液濃度繪制出標準曲線并得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)r2需要大于0.999以滿足正常的計算需求。在必要的時候還需要考慮到方法學比如精密度、穩(wěn)定性、加標回收率等。
4.含量計算
樣品測定的方法是和標準品相似的依據(jù)的是獲得的最佳的色譜條件,根據(jù)測出來的色譜峰看它的保留時間就能識別出齊墩果酸的樣品色譜峰。找到了這個樣品峰后對它進行手動或自動的積分處理并帶入到回歸方程就能得到齊墩果酸的含量。